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Prueba de HIV SIDA

 
 

El SIDA

 

 

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El HIV es el flagelo de nuestros días, como antes lo fuera, en diferentes épocas, la viruela, la fiebre amarilla o la peste bubónica. Pero existe una variante: el SIDA asocia muerte con la sexualidad, de forma más importante que antes lo hiciera la sífilis.

Esa enfermedad, conocida como morbo gálico, no tenía el estigma social que tiene el SIDA, aunque fuese originario también de prácticas zoofílicas (con camélidos en América) al igual que el SIDA lo fue, según algunas teorías, con primates en África. Muchos antropólogos dicen que esto se debe a la gran incidencia del SIDA entre homosexuales, aunque nada de esto está confirmado.

Tests de HIV

Las técnicas de test que vamos a desarrollar son empleadas en inmunología clínica aunque también sean comunes a otras ciencias biológicas para la detección de anticuerpos -usados cada día más en investigación básica.

El algoritmo clínico indica, ante la sospecha de infección con HIV, realizar una prueba de ELISA. Si ésta da positivo, no se comunica el resultado sino que se indica una repetición de la prueba de HIV porque el test tiene cierto porcentaje de falsos positivos (hasta 5% según algunos estudios estandarizados). Una vez que volvió a dar positivo, se pasa al estudio de blotting, confirmatorio (pues puede ser que de dos veces falso positivo, aunque en un porcentaje mucho menor).

El Western Blot es mucho más sensible y sin posibilidad de falsos positivos. El p24 (que es el nombre de la proteína) se usa como primera opción sólo en casos en que hay sospecha de infección muy reciente, puesto que evita el período ventana del test de ELISA. Esto se debe a su mayor costo en insumos.

A continuación veremos los fundamentos de las pruebas de HIV usadas actualmente en los laboratorios del mundo entero.

Enzimoinmunoensayo o prueba de ELISA

Cuando una enzima se utiliza para marcar un antígeno o un anticuerpo se pueden detectar cantidades muy pequeñas del agregado antígeno-anticuerpo.

Las enzimas son catalizadores biológicos que aceleran la transformación de un sustrato en el producto correspondiente. Si el mismo muestra un cambio visible, como puede ser actividad cromática, puede aprovecharse para medírsele la actividad enzimática y con ella inferir la cantidad de la enzima. Sabemos que a mayor cantidad de la enzima tendremos una mayor cantidad de producto final, siempre con una determinada cantidad de sustrato. Esto permite usar a la enzima como marcador uniéndola a un antígeno o anticuerpo, como si fuera una sustancia fluorescente, debiendo agregar el sustrato correspondiente para que su conversión en producto coloreado pueda ser medido en un espectrofotómetro.

Técnicas de blotting

Se trata de una técnica para determinar la concentración, complejidad y homologías de preparaciones con ácidos nucleicos.

Tiene como ventaja sobre otros medios inmunológicos (como por ejemplo la hibridación en fase líquida) que puede ser trabajado más fácilmente por su fase sólida, permitiendo un análisis semicuantitativo en varias muestras en simultáneo.

Western Blot

La técnica consiste en transferir proteínas desde un gel de poliacrilamida a un filtro de nitrocelulosa, en el cual las mismas pueden ser identificadas con un sondeador adecuado, por ejemplo, un anticuerpo específico.

Su fundamento: se trata de una técnica de Dot Blot, para ADN.

Pasos:

1. Fragmentación de 10000000 moleculas de ADN de elevado peso molecular con una o varias restrictasas.

2. Separación de los fragmentos por electroforesis en gel de agarosa. Se obtienen así varias bandas (o "manchas") según la migración de los fragmentos en el gel. Se desnatraliza el ADN en monocadenas, lo que permitirá la posterior hibridación.

3. Tranferencia de las bandas de ADN a un filtro de nitrocelulosa o nylon: el gel electroforético se coloca sobre el filtro antedicho, y por debajo de este último se coloca un papel de filtro seco. Encima del gel se coloca un papel embebido en buffer. El buffer irá hacia el papel de filtro seco, pero para hacerlo deberá pasar a través del gel y del filtro de nitrocelulosa. Al hacer esto arrastrará los fragmentos de ADN desde el gel hasta el filtro, donde se fijan por medios químicos, con lo que se obtiene una copia de los fragmentos del gel electroforético -en dicho filtro se puede efectuar la reacción de hibridización, y no así en el gel.

4. Luego se fija el ADN al filtro definitivamente por radiación ultravioleta o por calor.

El Western Blot tiene aplicaciones clínicas más allá de la prueba de HIV SIDA. Por ejemplo, en diagnóstico prenatal, puede servir para diagnosticar enfermedades genéticas tempranamente, como ser varias metabolopatías, al detectar mutaciones puntuales (deleciones, inversiones cromosómicas, etc). También es útil para el diagnóstico de infecciones por virus, bacterias y parásitos (detectando su ADN o ARN de forma directa), así como de oncogenes, amplificaciones de secuencias en leucemias y linfomas, por mencionar algunos.

El análisis forense se ve muchas veces beneficiado por este test, para la detección de los grados de parentesco, como ya vimos en otra sección de laboratorio.

En estudios de patogénesis, como ser la detección del genoma del virus de la Hepatitis B en carcinoma hepatocelular, virus del papiloma humano (HPV) en cáncer de cuello de útero, virus HTLV en leucemias, etc.

Comunidad

En Argentina son cada dia más los centros de salud y ambulatorios que realizan el test de HIV. Existen, además de los CeSAC, varios CEPAD, que funcionan tanto a nivel centralizado como descentralizado, es decir en hospitales, centros de salud o centros barriales, que brindan asesoramiento para realizar la prueba de HIV SIDA y luego proponen un interesante seguimiento. Es un equipo interdisciplinario dependiente de Coordinación SIDA del Ministerio de Salud.

 

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